Selección del Nozzle y presión adecuados
El separador celular FACSAria II cuenta con tres tamaños diferentes de orificio de nozzle 70, 85 y 100 micras, y puede separar (sortear) las células utilizando diferentes presiones.
El tamaño del nozzle y la presión a utilizar están directamente relacionados con tamaño de las células que se desee separar. A mayor tamaño celular corresponderá un mayor orificio de nozzle, menor presión a utilizar y por lo tanto menor velocidad de separación.
Existen normas generales para determinar el tamaño de nozzle y la presión adecuados, sin embargo se pueden realizar variaciones dependiendo de la resistencia o fragilidad de las células a separar. Por ello, es muy importante informar al servicio de citometría si se experimentan problemas luego de la separación.
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70 micras, separación a alta presión (70psi):
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Células de tejidos primarios: timo, bazo, médula ósea.
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Células de sangre periférica
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Líneas celulares derivadas de células B y T.
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85 micras, separación a presión media (45psi):
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Las listadas anteriormente pero que han sido transfectadas/transducidas con vectores de expresión.
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Células de cultivos primarios
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Células activadas
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100 micras, separación a baja presión (20psi)
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La mayoría de las líneas celulares
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Líneas celulares adherentes
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Células grandes y delicadas de tejidos primarios (neuronas, células dendríticas)
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Células recién transfectadas que expresan GFP
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Concentración celular*
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Presión alta: 8-15 millones/ml (max. 22,000 cel/seg.)
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Presión media: 7-10 millones/ml (max. 12,500 cel/seg)
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Presión baja: 5-9 millones/ml (max. 6,500 cel/seg)
* Estos valores corresponden a la concentración final luego del filtrado de la muestra por parte del servicio de citometría por lo que la muestra deberá ser proporcionada al doble de concentración.
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Goretti Azparren
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