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Selección del Nozzle y presión adecuados

El separador celular FACSAria II cuenta con tres tamaños diferentes de orificio de  nozzle 70, 85 y 100 micras, y puede separar (sortear) las células utilizando diferentes presiones.

El tamaño del nozzle y la presión a utilizar están directamente relacionados con tamaño de las células que se desee separar. A mayor tamaño celular corresponderá un mayor orificio de nozzle, menor presión a utilizar y por lo tanto menor velocidad de separación.

Existen normas generales para determinar el tamaño de nozzle y la presión adecuados, sin embargo se pueden realizar variaciones dependiendo de la resistencia o fragilidad de las células a separar. Por ello, es muy importante informar al servicio de citometría si se experimentan problemas luego de la separación.

  • 70 micras, separación a alta presión (70psi):

    • Células de tejidos primarios: timo, bazo, médula ósea.

    • Células de sangre periférica

    • Líneas celulares derivadas de células B y T.

  • 85 micras, separación a presión media (45psi):

    • Las listadas anteriormente pero que han sido transfectadas/transducidas con vectores de expresión.

    • Células de cultivos primarios

    • Células activadas

  • 100 micras, separación a baja presión (20psi)

    • La mayoría de las líneas celulares

    • Líneas celulares adherentes

    • Células grandes y delicadas de tejidos primarios (neuronas, células dendríticas)

    • Células recién transfectadas que expresan GFP

  • Concentración celular*

    • Presión alta: 8-15 millones/ml (max. 22,000 cel/seg.)

    • Presión media: 7-10 millones/ml (max. 12,500 cel/seg)

    • Presión  baja: 5-9 millones/ml (max. 6,500 cel/seg)

    * Estos valores corresponden a la concentración final luego del filtrado de la muestra por parte del servicio de citometría por lo que la muestra deberá ser proporcionada al doble de concentración.



"El uso de la citometría de flujo se ha extendido en los campos de la medicina (hematología, tumores sólidos, e inmunología), la biología celular, y de la separación celular para posteriores estudios genómicos y funcionales", Dr. Bruno Paiva, director de la plataforma.

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